快速學(xué)會(huì)使用熒光顯微鏡的方法

有的朋友在使用熒光顯微鏡時(shí)候，由于沒(méi)有弄懂原理，就盲目的去試驗(yàn)，較后找不到問(wèn)題出在哪里因而變得沮喪，所以我在這里給大家講一下原理，以后大家遇到熒光顯微鏡的問(wèn)題就可以觸類旁通了

先了解一下熒光的原理和性質(zhì)，然后才能確認(rèn)一下要使用的激發(fā)塊的類型。
1、熒光原理是用短波長(zhǎng)的光去激發(fā)標(biāo)本，標(biāo)本產(chǎn)生長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光。在光譜上，345nm是近紫外光（肉眼看不見），461nm是藍(lán)色光，530nm是綠色光。

2、你染細(xì)胞核的DAPI染料應(yīng)該用激發(fā)波長(zhǎng)359nm的近紫外光去激發(fā)，選擇吸收波長(zhǎng)461nm的濾色鏡去觀察藍(lán)色熒光。

3、你染細(xì)胞質(zhì)的綠色染料應(yīng)該用激發(fā)波長(zhǎng)345nm的近紫外光去激發(fā)，選擇吸收波長(zhǎng)530nm的濾色鏡去觀察綠色熒光。

4、你需要確認(rèn)一下你所使用的熒光激發(fā)塊，一般熒光激發(fā)塊有窄帶和寬帶兩種。
1）如果你使用的近紫外激發(fā)塊是寬帶的，你在顯微鏡下應(yīng)該可以同時(shí)看到藍(lán)色的細(xì)胞核和綠色的細(xì)胞質(zhì)！如果只有綠色細(xì)胞質(zhì)，可能是你的激發(fā)塊選錯(cuò)了，你可能選擇了藍(lán)光激發(fā)，所以只能看見綠色的細(xì)胞質(zhì)。
2）如果你使用的近紫外激發(fā)塊是窄帶的，則你將只能看到藍(lán)色或綠色中的一種，看你選什么波長(zhǎng)激發(fā)了。

解決顯微鏡放大400倍才能發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染問(wèn)題

那種做布朗運(yùn)動(dòng)的小黑點(diǎn)是產(chǎn)堿桿菌，感染后致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。一般在實(shí)驗(yàn)條件不嚴(yán)格的情況下，培養(yǎng)的細(xì)菌都會(huì)感染，在高倍顯微鏡下可見。其實(shí)在低倍下盯著細(xì)胞之間培基看也能看見小黑點(diǎn)。

其實(shí)在100×的倍數(shù)（甚至相差顯微鏡觀察40×）下就可以發(fā)現(xiàn)了，特別是在姨酶消化后，感覺(jué)和細(xì)胞混雜在一塊，特別臟，現(xiàn)在拿他們也沒(méi)有辦法了，

總結(jié)了兩點(diǎn)：
1）有條件的把細(xì)胞扔掉，但不排除重新購(gòu)買的細(xì)胞仍然有；還有就是沒(méi)條件的不要管它，
2）我覺(jué)得一般的實(shí)驗(yàn)所收影響不是很大。據(jù)說(shuō)用四環(huán)素可以殺滅焦蟲

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